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一、要樹立科學必須真（zhēn）實的觀念，實驗態度要（yào）端正。
 
要懷著一顆為了出具真實、準（zhǔn）確（què），可信數（shù）據而敬畏的心去申請能力驗證。
實驗要求科學嚴謹,實驗要預先充分練習和實踐。能力驗證是對實驗室綜合實驗水（shuǐ）平（人員，設備，環境等多因素）的評價。
首先要選好實驗項目，找到與之配套的方法，進行充分的方法（fǎ）驗證，從檢測員（yuán）能力，儀器設備性能，校檢（jiǎn）結果是否能滿足實驗需要，實驗檢（jiǎn）測多次實驗，檢測（cè）環境是否進（jìn）行了充分的考慮，實驗確認好實驗項目，認（rèn）真學習標準，理解標準，並做到標（biāo）準所規（guī）範的步驟，並對（duì）自己實驗有了（le）一（yī）定的（de）信心後再去申請能力驗證為宜。
舉例：某實驗室未經過充分實驗方法確認，實驗平時做的也（yě）少，直接申請（qǐng）了能力驗證。實驗過程生疏（shū），照（zhào）方抓藥，手忙腳亂，造成稀釋梯度不（bú）夠（gòu），平板幹燥，菌落蔓延，無法出具具體數值，實驗失敗。
 
二、實驗室收到盲樣菌株標本後，首先應做的事情利用集菌（jun1）儀或者微生物檢（jiǎn）查儀製備樣品。
 
1、檢查標本的性（xìng）狀（zhuàng）和（hé）確認包裝情況，然後按照要求去（qù）能力（lì）驗證（zhèng）網站提交收到（dào）樣品情況。
2、仔細閱讀參指導（dǎo）書，包括（kuò）標（biāo）本如何保存的信息，進行實驗室內部工作分配，明確工作任務和（hé）要（yào）求。
3、實驗前（qián）應嚴格按照作業指導書（shū）的要（yào）求製訂（dìng）檢驗（yàn）流程，認真做（zuò）好準（zhǔn）備（bèi）工作，包括實驗中需要使用的（de）器皿，須提前做好清潔滅菌。
 
三、能力驗證樣品處理。
 
1、定量項目，西林瓶內樣品不可分割，應全部用於檢測。一般參考書指導的是加40mL稀釋液製成40mL樣（yàng）品。
 
2、定量項（xiàng）目樣品稀釋。指導書標明了稀釋範（fàn）圍的，在稀釋範圍左右各加1個稀釋度進行；書上（shàng）沒有稀釋範圍的，多做稀釋倍數，選擇合適的稀釋倍數計數（一般可稀釋至（zhì）10^-8）。
 
3、定量項目，除了（le）要多做稀釋倍數外，同時同一稀（xī）釋度要多倒幾皿，從原理上來講，檢測過（guò）程屬於（yú）隨機抽樣檢查，平板越多，數據越接近真值。考慮性價比，又不可能一直瘋狂一個稀釋度很多平板，所以能力驗證時候多倒幾（jǐ）皿（mǐn），求好（hǎo）結果。
 
4、定性項（xiàng）目有一（yī）些重要步驟。
a、增菌及分離（lí）步驟尤其重要。選擇合適的增菌液和分離用培養基對目標菌（jun1）的檢出非常關鍵，選擇（zé）兩種以上的增菌液（yè）和分離用培養基對菌（jun1）株作直接（jiē）分離（lí）和增菌後分離。
b、劃線分離十分重（chóng）要，要把增菌液中的目標菌盡量（liàng）多的表達出來，要分出單個菌落並盡可能多挑取可疑（yí）菌落（luò），確保（bǎo）分離到（dào）目標菌。
c、生化試（shì）驗（yàn）和血清學試驗以營養瓊脂平板（bǎn）上的純（chún）培養細菌為好。
 
四、實驗過程一定要做陰陽（yáng）對照，全程空白（bái）對照。
 
再厲害的高手也有失手和看走眼的時（shí）候，所以陰陽對（duì）照就是一麵鏡子。對於一些熒光染色後進行判讀的實驗顯（xiǎn）得（dé）尤為重要。
這裏掃盲一（yī）個誤區，定量計數測菌數時，撸撸社视频會認為空白就是直接取1mL無菌水然後加入到平板裏，然後混菌倒皿，這是錯誤的。因為這樣做的話，隻能模（mó）擬證明（míng）稀釋後（hòu）倒平板這一步有沒有汙染（rǎn）。而無（wú）法證明從樣品稱取-樣品（pǐn）稀釋時候的汙染（rǎn）質（zhì）控情況（kuàng）。所（suǒ）以要做（zuò）全程空白對照。
全程空（kōng）白的含義就是把無菌液當（dāng）成樣品，然後走一遍實驗過程（chéng）。如果嚴（yán）格這麽（me）做的話，又（yòu）會走向另一個極（jí）端，所以全程空白隻從取樣開始至稀釋10^-1做（zuò）了簡化，而不做後續稀釋空白樣的混菌實驗。
在有（yǒu）些其他實驗時候，會有樣品空白以及（jí）稀釋液空白，比如大氣環境NOx和SO2的檢測，有興趣的可以去（qù）看看（kàn），對於全（quán）程空白的意（yì）義理解有更好的幫助。
 
五、培養基方麵需要（yào）注意的地方。
 
1、培養基配製充分（fèn）混勻後再滅菌。
正確做法是用（yòng）一部分水攪拌均勻後，再加入剩餘水（shuǐ）量，混勻後（hòu）滅菌（jun1）或分裝。
 
2、混菌法倒皿要充分混勻。
培（péi）養基倒完要（yào）左5圈右5圈（混勻速度一（yī）定要慢，目的是——避免培養基波動到二皿接觸的縫隙部分造成（chéng）後續汙染），找（zhǎo）較水平位置冷卻凝固。
 
3、微生物限度（dù）過濾結束（shù）後培養基要不要覆蓋問題。
覆（fù）蓋的目的是為了阻止活菌在培養基表層通過（guò）鞭毛移動，造成片狀（zhuàng）生長，無法（fǎ）計數這一不利現象的發生。這（zhè）裏可（kě）以發揮主觀能動性（xìng）-對於不運動的菌，可以不覆蓋（gài），對於運動的菌覆蓋。
總結一下：
a長（zhǎng）期檢測同一種樣品，不覆蓋並無蔓延現象，不覆蓋；長期檢測（cè）蔓延選（xuǎn）擇了覆蓋（gài），一直覆（fù）蓋。
b未知（zhī）樣品，進行覆蓋和不覆蓋的比對（duì）實驗，然後（hòu）決定以後同樣的樣品是否需要覆蓋（gài）。養成經（jīng）驗。
c能力驗證實驗，覆蓋和不覆蓋的都做，不要吝惜那麽一點點培養基或耗材，畢竟能（néng）力驗證實驗做的漂亮才是實驗室（是室而不是人！）能（néng）力的綜（zōng）合體現。
 
4、培養過程防止平（píng）皿幹燥。
培養過程中培養基可以倒的適當厚一些，比如（rú）25mL。培養箱底（dǐ）部接一個不鏽鋼盆，裝（zhuāng）上足量無菌（jun1）水（沒有就去買幾瓶什麽的水倒裏麵）。
 
5、培養完成要保留實驗平皿和其他相關材料。
作為能力驗證（zhèng），原（yuán）始記錄及實驗（yàn）報（bào）告還沒出具完成，各種材料還是保留至數據出具後較好，便於出現問題現查原因，馬上補救（jiù）。
 
題外話：很多檢測員等結果出了問題然（rán）後到網絡上來求救（jiù），結果一問平皿已經洗掉了，那就不知道是什（shí）麽狀況了。有時候你問她她（tā）還會振振有詞的講：10^-1，10^-2都蔓延了，不洗掉（diào）幹嘛，10^-5，10^-6沒長菌，不洗掉幹嘛？我當（dāng）時真的無（wú）語，也不想多說話就沒繼續講（jiǎng）了。現在我回答一下這個問題：我要你（nǐ）一套完整梯度濃度的平皿，可以看出你10倍（bèi）稀釋梯度是不是穩定，還有（yǒu）蔓延是個什（shí）麽狀況，到底有多（duō）少，是一片還是局部還（hái）是很小一部分，然後根據整體數據估算結果（當然實驗做（zuò）成這（zhè）樣也基本（běn）算失敗了，因為實驗沒有做到你（nǐ）可控的範（fàn）圍（wéi）），是補救的一種（並不可（kě）取，屬於垂死（sǐ）掙紮）。定量實驗時，當天做完的稀釋樣品也要放冰箱裏，雖然實驗要求不能複檢或重複檢（jiǎn）測，但作為微生（shēng）物專業你是（shì）知道菌放在2-8℃下並（bìng）不會長多少，如果（guǒ）第二天一看數據（jù）有蔓延或疑問，馬上再做一次，這（zhè）樣也應該在誤差（chà）範圍內出數。
 
6、 實驗培養過（guò）程勤觀察。
微生物培（péi）養過程一般需要幾小（xiǎo）時到幾十小時，要利用這段時間觀察（chá）培養箱及菌生長情況，比如溫度是否穩定，培養室內濕度如何等等，多思多看，準備預（yù）案（àn）。方（fāng）有可能得到與盲（máng）樣一致的實驗結果。
原始記錄應有條理、思路清晰,完整準（zhǔn）確地記錄菌株鑒定檢驗的全過程,原始記錄要包含時間、試驗現象、試驗結果三個要素，方便試驗出現問題的查找。