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一、微生物純培養（yǎng）技術
微生物在（zài）自然界中不僅分布廣，而且種類多，並多是混雜地生活在（zài）一起。要（yào）想研究或利用（yòng）某一微生物，必須（xū）把混雜的微生物類群分離開來，以得（dé）到隻含一種微生物的純培養。微生（shēng）物學中（zhōng）將在實（shí）驗室條件下由一個（gè）細胞或一種細胞群繁殖得到的後代稱（chēng）為微生物的純培養。
純培養技術包括兩個基本步驟：① 從（cóng）自然環境中分離培養對象。② 在以培養對象為唯一生物種類的隔離環境中培養、增（zēng）殖，獲（huò）得這一生物種類的細胞群體。針對不（bú）同微生物的特點，有許多分離方法。應用最廣的是平板法分離純培養。
（一）、用固體培養基（jī）分離純培養
單個微生（shēng）物在適（shì）宜的固體培養基表麵或（huò）內部生長、繁（fán）殖到一（yī）定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態結構的（de）子細胞生長群體，稱為菌落（colony）。當固體培養（yǎng）基表麵眾多菌落連成一片時，便成為菌苔（lawn）。不同微生物在特定培養基上生長形成的菌落或菌（jun1）苔一般都具有穩定的特征，可以成為對該微生物進行分類、鑒定的重要依據。大多數（shù）細菌、酵母菌、以及許多真菌和單細胞藻類能在固體培養（yǎng）基上形成孤立（lì）的菌落，采用適宜的平板分離法很容易得到純培養。所謂平板，即培養平板（culture plate）的簡（jiǎn）稱，它是指固體培養基倒入無（wú）菌平皿（mǐn），冷卻凝固後，盛固體培（péi）養基的平皿（mǐn）。這方（fāng）法包括將（jiāng）單個微生物分離和固（gù）定（dìng）在固體培（péi）養基（jī）表麵或（huò）裏麵。固體（tǐ）培養基用瓊脂或其它凝膠物質固化的培養基，每個孤立（lì）的活微生物體生長、繁殖形成（chéng）菌落，形成的菌落便於移植。最常（cháng）用的分（fèn）離（lí）、培養微生物的固體培（péi）養基是瓊脂固體培養（yǎng）基平板。這種由Kock建立的采用平板（bǎn）分（fèn）離微生物純培養（yǎng）的技術簡便易行（háng），100多年來一直是各種（zhǒng）菌種分離的最常（cháng）用（yòng）手段。
1. 稀釋倒平板法（pour plate method）
先將待分離的（de）材料用無菌水（shuǐ）作一係列的稀釋（shì）（如（rú）1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......），然後分別取不同稀釋液少許，與已熔化並冷卻至50℃左右（yòu）的瓊（qióng）脂培養基混合，搖（yáo）勻後，傾入（rù）滅過菌的培養（yǎng）皿中（zhōng），待（dài）瓊脂凝固後，製（zhì）成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間即可出現菌落。如果稀釋得當，在平板表（biǎo）麵或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落（luò），這個菌落可能就是由一個細菌細胞（bāo）繁殖形成的。隨後挑（tiāo）取該單個菌落，或重複以上操作數次，便可得到純培養。　
2. 塗布平板法（spread plate method）
由於將含菌材料先加到還較燙的培養基中再倒平板易造成某（mǒu）些熱敏感菌（jun1）的死亡，而且采用稀（xī）釋倒平（píng）板法也會使一些嚴格好氧（yǎng）菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學（xué）研究中更常用的純種分離方法是塗布平板法。其做（zuò）法是先將已熔化的培（péi）養基倒入無菌平皿（mǐn），製成無菌平板，冷卻凝固後，將一定量的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平（píng）板（bǎn）表麵，再用無菌玻璃塗棒將菌（jun1）液均勻分散至（zhì）整個平板表麵，經培養後挑取單個菌落（圖（tú）2-4）。
3. 平板劃線（xiàn）法（streak plate method）
用接種環以無菌操作沾取少許待分離的材料，在（zài）無（wú）菌平板表麵進行平行劃線、扇形劃線或其他形式（shì）的連續劃線，微生物細（xì）胞數（shù）量將隨著劃線次（cì）數的增加而減少，並（bìng）逐步分散開來，如（rú）果劃線適宜的（de）話，微生物（wù）能一一分散，經培養後（hòu），可在平板表麵得到單菌落。
4. 稀釋搖管法（dilution shake culture method）
用固體培養基（jī）分離嚴格厭（yàn）氧菌有（yǒu）它（tā）特殊的地方。如果該微生（shēng）物暴露於空氣中不立即死亡，可以采用通常的方法製備平板，然後置放在封閉的容器中培養，容器中的氧氣可采用化學、物理或生物的方法清（qīng）除。對於那些對氧氣更為敏感的厭（yàn）氧（yǎng）性微生物，純培養的分離則可采用稀釋搖管培養法進行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。先（xiān）將一係（xì）列盛無菌瓊脂（zhī）培養基的試管加熱使瓊脂（zhī）熔化（huà）後冷卻並保持在50℃左右，將（jiāng）待分離的（de）材料用這些（xiē）試管進行梯（tī）度稀釋（shì），試管迅速搖動均勻，冷凝後，在瓊脂柱表麵傾倒一層滅菌液體石蠟（là）和固體（tǐ）石蠟的混合物，將培養基和空氣隔開。培養後，菌落形成在瓊脂柱的中間。進行單菌落的挑取和移植，需先用一隻滅菌針（zhēn）將液體石蠟--石蠟蓋取出，再用一隻毛細管（guǎn）插入瓊脂（zhī）和管壁之間，吹（chuī）入無菌無氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在培（péi）養皿中，用無菌刀將瓊（qióng）脂柱切成薄片進行觀察和菌落的移植。
（二）、用液體（tǐ）培（péi）養基分離純培養
對於（yú）大多數細菌和真（zhēn）菌，用平板法分離通常是滿意的（de），因為它們的（de）大多數種類在（zài）固體培養基上長得很好（hǎo）。然而迄今為止（zhǐ）並不是所（suǒ）有的微生（shēng）物都能在固體培養基上生長，例如（rú）一（yī）些（xiē）細胞大的細菌、許多原生動物和藻類等，這（zhè）些（xiē）微生物仍需（xū）要用液（yè）體培養基分（fèn）離來獲得（dé）純培養。
通常采用的液體（tǐ）培養基分（fèn）離純化法是稀釋（shì）法。接種物在（zài）液體培養基中進行順序（xù）稀釋，以得到高度稀釋的效果，使一支試管中分配不到（dào）一個微生物。如果經稀釋後的大多數（shù）試管中沒有微生物生長（zhǎng），那麽（me）有微生物生（shēng）長的試管得到的培養物可能就是純培養物。如果經稀釋後的試管中有微生物生長的比例提高了，得到（dào）純培養物的機率（lǜ）就會急劇下降。因此，采用稀釋（shì）法進行液（yè）體分離，必須在同一個稀釋度的許多平（píng）行試管中，大多數（一般應（yīng）超過95%）表（biǎo）現為不生長。

（三）、單細胞（孢子）分離

稀釋法有（yǒu）一個重要缺點，它隻能分離（lí）出混雜微（wēi）生物群體中（zhōng）占數量優勢的種類，而在自然界，很多微生物在混雜群體中都是少數。這時，可以采取顯微分離法從混雜群（qún）體中直接分離單個細胞或單個個體進行培養以獲得純培養，稱為（wéi）單細（xì）胞（或單孢子）分離法。單細胞分離法的（de）難度與細胞或個體的大（dà）小成反比，較大的微（wēi）生物如藻類、原生動（dòng）物（wù）較容易，個體很小的細菌則較難。
對於較大的（de）微生物，可采用毛細管（guǎn）提取單個個體，並在大量（liàng）的（de）滅菌培養基中轉移清洗幾次，除（chú）去較小微生物的汙染。這項操作（zuò）可在低（dī）倍顯微鏡，如解剖顯微鏡下進行。對於個體相對（duì）較（jiào）小的微生物，需采用顯微操作儀，在顯微鏡下進行。目前，市場上有售的顯微操作儀種類很多，一般是通過機械、空氣或油（yóu）壓傳動裝置來減小（xiǎo）手的動作幅（fú）度，在顯微鏡下用毛細管或顯微針、鉤、環等挑取單個微生物細胞或孢子（zǐ）以獲得純培養。在沒有顯微操作（zuò）儀時，也可采用一些變通的方（fāng）法在顯微鏡（jìng）下進行（háng）單細胞（bāo）分（fèn）離，例如將經適當稀釋後的樣品製備成小液滴在顯微鏡（jìng）下觀察，選取隻含一（yī）個細胞的液體來進行純培養物的分離（lí）。單細胞分（fèn）離法對操作技術有比較高的要求，多限於（yú）高度專（zhuān）業化的科學研究中采用（yòng）。

（四）、選擇培養分離

沒（méi）有一種培養基或一種培養條件能夠滿足自然界中一切生物生長的要求，在一定程度上所有的（de）培養基都（dōu）是選擇性的。在一種（zhǒng）培養基上接種多種微生物，隻有能生長的才生長，其它被抑製。如果某種微生物的（de）生長（zhǎng）需（xū）要（yào）是已知的，也可以（yǐ）設計一套（tào）特定環境使之特別適合這種微生物的生長，因（yīn）而能夠從自然界混雜的微生物群體（tǐ）中把這種微生物選擇培養出來，盡管在混雜的微生物群體中這種微生（shēng）物可能隻占少數。這（zhè）種通過（guò）選擇（zé）培養進行微生（shēng）物純培養分離的技術（shù）稱為（wéi）選擇培養分（fèn）離，是十分重要的，特別對於從自然界（jiè）中分離、尋找有用的微生物（wù）。在自然（rán）界中，除了極特殊的情（qíng）況外，在大（dà）多數場合下微生物群落是由多種微生物組成的（de），因（yīn）此，要從（cóng）中分離出所（suǒ）需（xū）的特定微生物是十分困難的，尤其當（dāng）某一種微生物所存在的數量與其它微生（shēng）物相比非常少時，單采用一（yī）般的（de）平板稀釋方法幾乎是不可能（néng）分離到（dào）該種微生物的。例如，若某處的土壤（rǎng）中的（de）微生物數量在10^８時，必（bì）須稀釋到（dào）10^-6才（cái）有可能在平板（bǎn）上分離到單菌落，而如果所需的微生物的數量僅為（wéi）10^２-３，顯然不可能在一般通用的平板上（shàng）得到該微生物的單菌落。要（yào）分離這種微生物，必須根據該微生物的特點（diǎn），包括（kuò）營養、生理、生長條件等，采用選（xuǎn）擇培養分離的方法。或抑製使大（dà）多數微生（shēng）物不能生長，或造成有利於該菌生長（zhǎng）的環境，經過一定時（shí）間培養後使該菌在群落中（zhōng）的數量上升（shēng），再通過平板稀釋等方法對它進行（háng）純培養分離。
1. 利用選（xuǎn）擇平板進行直接分離
主要（yào）根據待分離微生物（wù）的特點選擇不同的培養條件，有多（duō）種方法可以采用。例如在從土壤中篩選蛋白酶產生菌時，可以在培養基中添（tiān）加牛奶或酪素製備培養（yǎng）基平板，微生物生長時若產生（shēng）蛋白酶則會（huì）水解牛奶或酪素，在（zài）平板上形成透明的（de）蛋白質水解圈。通過菌株培養時產生的蛋（dàn）白質水解圈對產酶菌株進行篩選（xuǎn），可以（yǐ）減少工作量，將那些大量的非產蛋白（bái）酶（méi）菌株淘汰；再如，要（yào）分離高溫菌，可在高溫條件進行培養（yǎng）；要分（fèn）離某種抗菌素抗（kàng）性菌株，可在加（jiā）有抗菌素的（de）平板上進行分離；有些微生物如螺（luó）旋體、粘細（xì）菌、藍細菌（jun1）等能（néng）在瓊脂平板表麵或裏麵滑行，可以利用它們的（de）滑動特點進行分離純化，因（yīn）為滑（huá）行能使它們自己（jǐ）和其它不能移動的微生物分開。可（kě）將微生物群落點種到平板上（shàng），讓微生物滑行，從（cóng）滑行前沿挑取接種物接種，反複進行，得到純培養物。
2. 富集培養
主要是指利用（yòng）不（bú）同（tóng）微生（shēng）物（wù）間生命活動特點的不同，製定特定（dìng）的環境條件，使僅適應於該條件的微生物旺盛生長（zhǎng），從（cóng）而使（shǐ）其在群落中的數（shù）量大大增加，人們能夠（gòu）更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。富集（jí）條件可根（gēn）據所（suǒ）需分離的微生物的（de）特點從物理、化學（xué）、生物（wù）、及綜合多個方麵進行選擇（zé），如溫度、pH、紫外線、高壓（yā）、光（guāng）照（zhào）、氧氣（qì）、營養等等許多方麵。如采用富集方法從（cóng）土壤中分離能降解（jiě）酚類化合物對羥基苯甲酸的微（wēi）生物的實（shí）驗過程。首先配製以對羥基（jī）苯甲酸為唯一碳源的液體培養基並分（fèn）裝於燒瓶中，滅菌後將少（shǎo）量的土壤樣品接種於該液體培養基中，培養一定時間，原來透（tòu）明的培養（yǎng）液會變得（dé）渾（hún）濁，說明已有大量微生物生長。取少量上述培（péi）養液轉移至新鮮培養液（yè）中重新培養（yǎng），該過程經數次重複（fù）後能利用對羥基（jī）苯甲酸的微生物的比例在培養物（wù）中將大大提高，將培養液塗布於以對羥基苯甲酸為（wéi）唯一碳源的瓊脂平板，得（dé）到的微生物菌落中的大（dà）部分都是能降解對羥基苯甲酸的微生物。挑取一（yī）部分單（dān）菌落分別接種到含有及缺乏對羥基苯甲酸的液體培養基中進行培養，其中大（dà）部（bù）分在含（hán）有對羥基（jī）苯甲酸的培養（yǎng）基中生長，而在沒有對（duì）羥基苯甲酸的培養基中表現為沒有生長，說明（míng）通過該富集程序的確得到了欲分離的目標微生物。通過富集培養使原本在自然環境中占（zhàn）少數（shù）的微（wēi）生物的數量大大提高後，可以（yǐ）再通過（guò）稀釋倒平板或平板劃（huá）線（xiàn）等操作得（dé）到純培養（yǎng）物。
富集培養是微生物學（xué）家最強有力的技術（shù）手段之一（yī）。營養和生理條件的幾乎無窮盡的組合形式（shì）可應（yīng）用（yòng）於從自然界選擇出特定微生物的（de）需要。富集培養方法提供了按照意願從自然（rán）界（jiè）分離出特定已知微生物（wù）種類的有力（lì）手段，隻要掌握這種微（wēi）生物的特（tè）殊要求就行。富集培養法（fǎ）也可用來分離培養出由科學家設計的特定環境中能生長的微生物，盡管撸撸社视频並不（bú）知（zhī）道什麽微生物能在這種特定的環境中生長。
（五）、二元培養物
分離的目的通常是要得到純培養。然而，在有（yǒu）些情況下這是做不到的或是很難作到的。但可（kě）用二元培養物作為（wéi）純化培養的替代物。隻有一種微生物的培養物稱（chēng）為純培養物，含有二種以上微生物的培養物稱為混合培養物，而如果培養物中隻（zhī）含有（yǒu）二種微生物，而且是（shì）有意識的保持二者之間的特定關係的培養物稱（chēng）為二元培養物。例如二元培養（yǎng）物是保存病毒的最有（yǒu）效（xiào）途徑，因為病毒是細胞生物的嚴格的細胞內寄（jì）生物。有一些具有細胞的（de）微生物也是嚴格的其它生物的細（xì）胞內寄生物，或特殊的共生關係。對（duì）於這些生物，二元培養物是在實驗室控製條件下可能達到的（de）最接近於（yú）純培養的培養方（fāng）法。
在自然環境中，獵（liè）食細小微生物（wù）的原（yuán）生動物也很（hěn）容易用二元培養法在實驗室培養，培養物由原生動物和它（tā）獵食的微生物二者組成。例如，纖毛蟲、變形蟲和粘菌。對這些生物，二者的關係可能並不是嚴格的。這些生物（wù）中有（yǒu）些能夠（gòu）純（chún）培養，但是其營養要求（qiú）往往極端（duān）複雜，製備純（chún）培養的培養基很（hěn）困（kùn）難、很費事。
二、微生（shēng）物生長量的測（cè）定
微生物學研究中常常要進行微生物生（shēng）長量的（de）測定，有多種方法用於微生物生長量的測定，概括起來常用的有以下幾種：
（一）直接（jiē）計（jì）數法 ( 又稱（chēng）全數法 )
1 、計數器直接測數法
取定量稀釋的單細胞培養物懸液放置在血球計數板 ( 細胞個體形態較大的單細胞微生物，如酵母菌等 ) 或細菌計數板（bǎn） ( 適用於細胞個體形態較小（xiǎo）的細菌 ) 上，在顯微（wēi）鏡下計數一定體積（jī）中的平均細胞數，換（huàn）算出供測樣品的細胞數。
（ 1 ）血球計數板（bǎn）及細胞計數（shù）
血球計數板是一種在特定平麵上劃有格子（zǐ）的特殊載片。在劃有格（gé）子的區域中，有分別用雙線和（hé）單線分隔而成的方格。其（qí）中有以（yǐ）雙線為（wéi）界劃成的方格 25( 或 16) 格，這種以雙線為（wéi）界的格子稱為中格，其內有以單線為界（jiè）的 16 （或 25 ）小格。因此，用（yòng）於細胞計數的區（qū）域的總（zǒng）小格數為：25×16 = 400 。該 400 個小格排成一正方形的大方格，此大方格的每條邊的邊長為 1 mm ，故 400 個小格的總麵積為 1mm^２。
在進行細胞計數（shù）前，先取蓋玻片蓋於計數方格之上，蓋玻片的下平麵與（yǔ）刻有方格的血球計數板平麵之間留有0.1mm 高度的空隙。含（hán）有細胞的供測（cè）樣品液被加注在此空隙中。加注在 400 個（gè）小格（ 1mm^２ ）之上與蓋玻片之（zhī）間的空隙中的液體總體積應（yīng）為：1.0mm×1.0mm×0.1mm = 0 . 1mm^３
一般表示樣品細胞濃度的單位為：億個 / mL 。因此，在計數後，獲得在 400 個小格（gé）中的細胞總數，再乘以 10 ^４ ，以換算成每 mL 所含細胞數。其計算公式如（rú）下：
菌液的含菌數（shù） /mL = 每小格平均菌（jun1）數× 400 × 10 000 ×稀釋倍數
在進行具體操作時，一般取五個中格進行計數，取格的方法一般有兩種：① 取計數板斜角線相連的 5 個中格；② 取計數板 4 個角上的 4 個中格和計數板正（zhèng）中央的 1 個中（zhōng）格。對（duì）橫跨位於方格邊線上的細胞，在計（jì）數（shù）時，隻計一個方格 4 條邊中的 2 條邊線上的（de）細胞，而另（lìng）兩條邊線上的（de）細胞則不計；取邊的原則是每個方格均取上邊線與右邊線或下邊線與左邊（biān）線。

圖 3 — 5 血球計數板方格示意圖
（ 2 ）細菌計數板及細胞計數
細菌計數板與血球計數板結構大同小異，隻是刻有格子的計數板平麵與蓋玻片之間的空隙高度僅0.02mm 。因此，計算（suàn）方法稍有差異（見以下計算公式），餘者與血（xuè）球計數板法同（tóng）。
菌液樣（yàng）本的（de）含菌數 /mL = 每（měi）小格平均菌數× 400 × 50 000 ×稀（xī）釋倍數
2 、塗片染（rǎn）色計數
用計數板附帶的 0.01mL 吸管，吸取定量稀釋的（de）細菌（jun1）懸液，放置刻有 1 cm ^２ 麵積的玻（bō）片上，使菌（jun1）液均勻地塗布在 1cm ^２麵積上，固定（dìng）後染色，在顯微鏡下任意選擇幾個乃至十幾個視野來計算（suàn）細胞數量。根據計（jì）算（suàn）出的視野麵積核算出每 1cm ^２中的菌數，然後按 1cm ^２麵積上的菌液量和稀釋度，計算每 mL 原液中的含菌數。
原菌液（yè）的含菌數 /mL = 視野中的平均菌數× 1cm^２/ 視野麵積× 100 ×稀釋（shì）倍數
3 、比濁法
這是測定菌懸液中細胞數量的快速方法。其原（yuán）理是菌懸液中的單細胞微生物，其細（xì）胞濃（nóng）度與混濁度成（chéng）正比，與透光度成反比。細胞越多，濁度越大，透光（guāng）量越（yuè）少。因此，測（cè）定菌懸液的光密度 ( 或透光（guāng）度 ) 或濁度可以反映細胞的濃度。將未知細胞數的懸液與已知細胞數的菌懸液相比，求出未知菌懸液所（suǒ）含的細胞數。濁度計（jì）、分光光度儀是測定菌懸液細胞濃度的常用儀器。此法比較簡便，但使用有局限性。菌懸液顏（yán）色不宜太深，不能混雜其他物質，否則不能獲得正確結（jié）果。一般在用此法測定細胞濃度時，應先（xiān）用計數法作對應（yīng）計數，取（qǔ）得經驗數據，並製作菌（jun1）數（shù）對（duì） OD 值的標準曲線方便查獲菌數（shù）值。
（二）活菌計（jì）數法 ( 又叫間接計數法 )
活菌計數法又稱間接計數法 。直接計數法測定到（dào）的（de）是死、活細胞總數，而間接計數法（fǎ）測得的僅是活菌數。這類（lèi）方法所得的數值往往（wǎng）比（bǐ）直接計數法測得的數值小。
1 、平板菌落計數
此法是基於（yú）每一個分散的活細胞在適宜的培養基中具有生長繁殖並能形成一個菌落的能力；因此，菌落（luò）數就是（shì）待測樣品所含的活菌數。
將單細胞微生物待（dài）測液經（jīng） 10 倍係列稀釋（shì）後，將一定（dìng）濃度的稀釋液定量地接種到瓊脂平板培養基上培養，長（zhǎng）出的菌落數就是稀釋液中（zhōng）含有的（de）活細胞數，可以計（jì）算出供（gòng）測（cè）樣品中的（de）活細胞（bāo）數（shù）。但應注意，由於各種原因，平板（bǎn）上的單個菌落可能並不是由一個菌體細胞形成的，因此在表達單位樣品含（hán）菌數（shù）時，可（kě）用單（dān）位樣品（pǐn）中形成菌落單位來表示，即 CFU ／ mL 或 CFU ／ g(CFU 即 colony-forming unit) 。
2 、液體稀釋最大或（huò）然數法測數
取定量（ 1mL ）的單細（xì）胞（bāo）微生物懸液，用培養液作定量 10 倍係列稀（xī）釋，重複 3－5 次，將不同稀釋度的係列稀釋管置（zhì）適宜溫度下培養。在稀釋度合適的前提下，在菌濃度相對較高的稀釋管內均出現菌生長，而自某個稀釋度較（jiào）高的稀（xī）釋管開始至稀釋度（dù）更高的（de）稀釋管中均不出（chū）現菌生長（zhǎng），按稀釋度自低到高的順序，把（bǎ）最後三個稀釋度相對較高的、出現菌生長（zhǎng）的稀釋管之稀釋度稱為臨（lín）界級數。由 3 至（zhì） 5 次重複的連續三級臨界級數獲得指數（shù），查相（xiàng）應重複的最大或然數 ( 即 most probable number ， MPN) 表求得最大可能數，再乘（chéng）以出現生長的臨界級數的最低稀釋度，即可測得比較可（kě）靠的樣品活（huó）菌濃度。
在實踐中，通常以5管重複（fù）為一個組，故這裏僅列出5次重複測數統計表。隻要知道了數量指（zhǐ）標，就（jiù）可查知近似值。
3 薄膜過濾計數法
測定水與空氣中的活菌數量（liàng）時，由於含菌濃（nóng）度低，則使（shǐ）用微（wēi）生物限（xiàn）度檢測儀可先將待測樣品 ( 一定體積的水或空氣 ) 通過微（wēi）孔薄膜 ( 如硝化纖維薄（báo）膜 ) 過濾濃縮，然後把濾膜放在適當的（de）固體培養基上培養，長出菌落後即可計數。
（三）細胞物質量測定法
1 、幹重法
集菌儀過（guò）濾定量培養物用離心或過濾的方法將（jiāng）菌體從（cóng）培養（yǎng）基中分離出來，洗淨、經常壓或真空幹燥，幹燥（zào）溫度常采用105℃、100℃或紅外線烘幹（gàn）至恒重，也可在較低溫度（dù）（80℃或40℃）下真空幹燥，然後精確稱重，即可計算出培養物的總生物（wù）量。過濾時絲狀真菌（jun1）用濾紙過濾 ，細菌用醋酸纖維膜等進行過濾。一般細菌幹重約為濕重的 20 ％ ～ 25 ％。此法直接而又可（kě）靠，但要求測定時菌體（tǐ）濃度較高，樣品中不含非菌體的幹物質（zhì）。
2 、含氮量測定法
細胞的蛋白質含量是比較穩定的，可以從蛋白質（zhì）含量的測定求出（chū）細胞物質量。已知細菌細（xì）胞幹重的含氮量一般為12%～15％，酵（jiào）母菌為7.5％，黴菌為6.0％。一般細菌的含氮量約為原生質幹重的 14 ％。而總氮量（liàng）與細胞蛋白質總含量的（de）關係可用下式計（jì）算：
蛋白質總量 = 含氮量百分比× 6.25
3 、DNA 測定法
這種方法（fǎ）是基於（yú） DNA 與 DABA — 2HCl( 即新配製的（de） 20 ％ W ／ W ， 3,5 —二（èr）氨基苯甲酸 - 鹽酸溶液 ) 結合能（néng）顯（xiǎn）示特殊熒光反應的原（yuán）理，定量測定培養物的菌懸液的熒光反應強度，求得 DNA 的含量，可以直接反映（yìng）所含細胞（bāo）物質的量。同時還可根據 DNA 含量計算出細（xì）菌（jun1）的數量。每個細菌平均（jun1）含 8.4 × 10 ^－５ng DNA 。
4 、其他生理指標測定（dìng）法
微生物新（xīn）陳代謝的結果，必然要消耗或產生一定（dìng）量的物質。因此也可以用（yòng）某物質的（de）消耗量或某產物的形成量來表示微生物的生長量。例如通過測定微生物對氧的吸收、發酵糖產酸量或 CO_２的釋放量，均可用來作為生長指標。使用這一方法時，必（bì）須注意作為生長指標的那些生理活動，應（yīng）不受外界其他因素的影響或幹擾，以便獲得準確的結果。
從上表中可以看出，每種方法都各（gè）有優點和局限性。隻（zhī）有在考慮（lǜ）了這些因素同需要著手解決的問題之間的關係以後，才能對具體的方法進行選擇。正如前麵說過的，平皿菌落計數法（fǎ）是微生（shēng）物學中應（yīng）用最多的常規方法，掌握這一方法的原（yuán）理和實際操作，很有必要。此法在理（lǐ）論上能反映活菌數。另外當用兩（liǎng）種不同的方法測量細菌的生長量時，其結果不一致是完全可（kě）能的。
測定微生物的生長量，在理論和實踐上都十分重要。當撸撸社视频要對細菌在不同培養基中或不同條件下的生長情況進行（háng）評價或解釋（shì）時，就必須用數量來表示它的生長。例如可以通過細菌（jun1）生長的快慢來（lái）判斷某一條件是否適合。生長快的細胞，最終的總收獲量可能沒有另一些條件下的收獲量大。在另一些（xiē）條（tiáo）件下，生長速率雖然較低，但它卻可在一段時間內不斷增加。因此（cǐ），隻有具備了有關生長的定量知識（shí），才能（néng）在實（shí）際應（yīng）用中作出正確的選擇，以利於科研和生產活動的進一步（bù）開展。