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滅菌是指(zhǐ)用物理或化學的方法,殺死物體表(biǎo)麵和孔隙內的一切(qiē)微生物或生物體,即把所有生命的物質全部殺死。常用的滅菌方法可分為物理的和化學(xué)的兩類:物理方法如幹熱(烘燒和灼燒)、濕熱(常壓或高壓蒸煮)、射線處理(超聲波、微波)、過濾、清洗和大量無菌(jun1)水(shuǐ)衝洗等措施。化學方法是(shì)使用甲醛、過氧化氫(qīng)、高錳酸鉀(jiǎ)、次氯酸鈉、抗菌素(sù)、酒精化學(xué)藥品處理等。
微生物檢查培養基常用的滅菌方(fāng)法主要是濕熱滅菌(jun1)和過濾除菌。
1、濕熱滅菌:
蒸(zhēng)汽(qì)在冷凝時釋放出大量潛能,並且蒸汽具有強大穿透力,蒸汽的濕熱破壞(huài)菌體蛋(dàn)白質和核酸的化學鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙(ài)而死亡。濕熱滅菌的效果,取決於致死溫度和致死時間。致死溫度是殺滅微生物的極限溫度。致死(sǐ)時間是在致死溫度下殺(shā)滅全部微生物所需時間。
高壓蒸汽滅菌適合於耐高溫培(péi)養基、接種器械和(hé)蒸餾水的滅菌。培養基分裝後應立即滅菌,應(yīng)在當天(tiān)內(nèi)完成滅菌工作,不可過夜。消毒時間不宜過長,也不能超過規(guī)定的壓力範圍,否則有機物質就(jiù)會在高(gāo)溫(wēn)下分解,失去(qù)營養作用,也會使培養基變質、變(biàn)色,甚至難以凝固。
培養基配製後,應按驗證過的高壓滅菌程序滅(miè)菌(jun1)。2015版《中國藥典》第三次公示稿,1106 非無菌(jun1)產品微生(shēng)物限度檢查:控製菌檢(jiǎn)查法中,列出部分(fèn)培養基的滅菌(jun1)條件(jiàn),如(rú)下(xià)表(biǎo)所示:
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培養基名(míng)稱 |
滅菌條件 |
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腸道菌增(zēng)菌液體培(péi)養基 |
加熱至(zhì)100℃ 30分鍾,立即冷卻 |
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紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基(jī) |
加熱煮沸(不能在(zài)高壓滅菌器中加熱) |
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RV 沙(shā)門菌增(zēng)菌液體(tǐ)培養基 |
滅菌溫度不能超過115℃ |
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木糖賴氨(ān)酸脫氧膽酸鹽(yán)瓊脂培養基 |
加熱至沸騰(不能在(zài)高壓(yā)滅菌器中加熱) |
其他未明(míng)確標示滅菌(jun1)方法的培養基,按供(gòng)應商(shāng)標簽(qiān)所示滅菌方法滅菌或按驗證過的高壓滅菌程(chéng)序滅菌。
2、過濾除菌(jun1):
一些抗生素及有機物等,遇熱容易分解,不(bú)能與培養基(jī)一起進行高溫滅菌,而(ér)要使用細菌過(guò)濾器濾去其中的雜菌(jun1),例如含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂培(péi)養基。過濾(lǜ)後的溶液要立即加入培養基中,若為液體培養基,可在培養基冷(lěng)卻至30℃時加入;若為固體培養基,必須在培養基凝固之前(50-60℃)加入,振蕩使溶液(yè)與(yǔ)其他成分混合均勻。
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